简易凝胶法(Easygel)
简易凝胶是琼脂的替代产品,使用和运输都更方便。 简易凝胶法是果胶凝胶法,是一个分为两部分的无菌测试,由液体培养基和用特殊配方预处理的培养皿组成。当液体培养基倒入预处理的培养皿中时,两者混合使培养基凝胶化。 完全凝胶化约需40分钟,之后培养皿就可以使用了。简易凝胶有几种配方,包括普通的总生菌数(标准菌落总数)配方和已获专利的Coliscan配方。
Coliscan培养基采用显色化学品和养料这种已获专利的组合,以不同颜色标记大肠菌群和大肠杆菌,以便识别和分离。这意味着可以将水或其他物料的测试样本添加到培养基中,大肠杆菌菌落将呈粉色到品红色,而大肠杆菌菌落将呈紫蓝色。其他细菌类型的菌落通常呈无色。使用Coliscan培养基有两种方法:Coliscan Easygel(简易凝胶法)和Coliscan-MF(膜滤法)。
简易凝胶由微生物实验室(Micrology Labaroties)研发,该公司专门研究易于使用、准确的水测试和微生物应用方式。
他们的专利测试方法不需要依赖琼脂和昂贵设备,而且是测试水中大肠菌群和大肠杆菌最简单、最有效的方法。
适用条件
正确使用的情况下,简易凝胶法和膜滤法的效果都非常好。简易凝胶(Easygel®)以液体培养基形式提供,该液体培养基含有胶凝剂,当将其倾入含有钙离子层的培养皿中,就会使培养基固化,使其与标准预混合琼脂皿相似。可以用测试物料划过或拭抺凝胶培养皿,或者在倒入培养基之前,可以加入小测试样本(通常为1-5毫升)。膜滤由不含胶凝剂的液体培养基组成,与已过滤含水测试样本(样本容量通常较大)的微孔膜过滤器一起使用,使小培养皿中的无菌垫饱和。两种方法都使用非常相似的配方和成分(胶凝剂除外)。(如果熟悉膜滤法,即以琼脂为培养基,并在培养皿形成固体层作为膜过滤器基础的过滤方法,Coliscan®也可以以这种方式制备。除非收到定制请求,滤膜目前不以此方式提供。) 简易凝胶(Easygel®)设计旨在样本每毫升的目标生物数量相当高时使用,因此将1-5毫升样本直接加入到培养基中时,每个培养皿形成的菌落数目将足以做到准确计数。 当测试样本的目标生物数量非常低,并且有必要验证目标生物是否真的不存在或计数非常低时,会使用膜滤法;而当测试物料中目标生物数量相对较大时,简易凝胶法极为适用于确定其计数。
制作,使用和维护
使用指示
用无菌容器采集水样,并将其运回测试地点,或直接从水源提取测量水样,并直接采入Coliscan简易凝胶瓶中。如果水样在加入培养皿前保存超过一(1)小时,或将已加入样本中的任何Coliscan简易凝胶瓶运输超过十(10)分钟,应放冰上或放进冰箱,直至将其加入培养皿。
- 培养皿应有适当的样本信息标识。用永久马克笔或蜡笔都可以。
- 将样本容器中的水样无菌转移到Coliscan简易凝胶瓶中(请参阅下表的种菌数量粗略指引)。旋动瓶子使种菌均匀,然后将培养基/种菌混合物倒入正确标记的培养皿中。盖上培养皿。轻轻旋转注有液体的培养皿,直到整个培养皿都被液体覆盖(但要小心,不要溅在侧面或盖子上)。
- 培养皿可以正面朝上,直接放进水平培养箱,或在仍是液体时,放置到房间内温暖的地方。固化过程需时约40分钟。
- 在35°C(95°F)下培养24小时,或在室温下培养48小时。(见有关培养的注释)
- 检查培养皿
- 点算Coliscan培养皿上的所有紫色菌落(忽略任何淡蓝色、蓝绿色或白色菌落),并以每毫升水的大肠杆菌含量报告结果。注意:要报告每100毫升水的大肠杆菌含量,首先得找出相乘的基础数。要做到这一点:首先,将100除以您用于样本的毫升数。然后,将您的培养皿中的计数乘以#1的结果。例如3毫升样本的话,就是100 / 3 = 33.3。因此,4个大肠杆菌菌落乘以33.3,即相当于每100ml水中大肠杆菌含量为133.2。
- 点算Coliscan培养皿上的所有粉色和紫色菌落(忽略任何淡蓝色、蓝绿色或白色菌落),并以每毫升水的大肠菌群含量报告结果。
- 点算Coliscan培养皿上的所有紫色菌落(忽略任何淡蓝色、蓝绿色或白色菌落),并以每毫升水的大肠杆菌含量报告结果。注意:要报告每100毫升水的大肠杆菌含量,首先得找出相乘的基础数。要做到这一点:首先,将100除以您用于样本的毫升数。然后,将您的培养皿中的计数乘以#1的结果。例如3毫升样本的话,就是100 / 3 = 33.3。因此,4个大肠杆菌菌落乘以33.3,即相当于每100ml水中大肠杆菌含量为133.2。
- 在一般垃圾处理之前,请执行以下操作之一:
- 将培养皿和Coliscan瓶放进压力锅中,以15磅压力煮15分钟。这是最好的方法。
- 将培养皿和Coliscan瓶放进耐烘箱高温袋中,密封并在烘箱中以300°F加热45分钟。
- 将培养皿和Coliscan瓶子放进大平底锅中,以水盖过,煮45分钟。
- 在每个培养皿的培养基表面上,加入5毫升(约1茶匙)漂白剂。请至少等待5分钟。放入防水袋中,丢进垃圾桶。
- 将培养皿和Coliscan瓶放进压力锅中,以15磅压力煮15分钟。这是最好的方法。
结果解释
此测试方法利用相沿成习、广泛接受的大肠菌群和大肠杆菌识别标准,适当的使用就会得到准确的结果。因此,如果您根据使用Coliscan简易凝胶的结果,怀疑水源受到严重污染,您应该联系当地的卫生部门,并要求他们协助进行官方水质评估。
非粪大肠菌群在大自然中广泛分布,被认为是天然存在的土壤生物体,也存在于温血动物和人类的肠道。粪大肠菌群通常是只在温血动物和人类肠道中发现的大肠菌群。因此,粪大肠菌群污染是某种形式的粪便污染的结果。污染来源可能是动物或人类。
费用
取决于试剂盒的内容以及使用哪种类型的凝胶,简易凝胶试剂盒的费用介于14至55美元之间。
实地经验
- 对不同水测试方法(包括简易凝胶)的研究:Comparison and verification of four field-based microbiological tests: H2S test, Easygel®, Colilert®, PetrifilmTM.
- 使用Coliscan简易凝胶分析危地马拉农村高地饮用水污染物浓度:Drinking Water Field Analyses for the Detection and Enumeration of Coliform Bacteria in Rural Guatemalan Highlands
操作指南、视频和链接
- 简报演示:Current Issues and Approaches to Microbial Testing of Water: Applicability and Use of Current Tests in the Developing World
- The History of the Development of the Easygel ® and Coliscan ® Methods
- 简报演示的PDF版:E. coli Monitoring – Effective Techniques and Test Kits for Volunteers
- 附图像的Easygel使用指示:Serial Dilution Instructions